ELISA實(shí)驗(yàn)原理

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)酶催化底物顯色實(shí)現(xiàn)定性或定量分析?。其核心原理包括：

　　固相包被?：抗原或抗體通過(guò)物理吸附固定在微孔板表面?。

　　免疫反應(yīng)?：待測(cè)樣本與包被物結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物?。

　　信號(hào)放大?：酶標(biāo)記的二抗或底物催化顯色，通過(guò)酶標(biāo)儀讀取吸光度值?。

　　主要ELISA類型及適用場(chǎng)景

　　類型? ?          原理特點(diǎn)?                                   典型應(yīng)用?

　　直接ELISA?  抗原直接包被，酶標(biāo)一抗檢測(cè)    病毒顆粒、純化蛋白定量?

　　間接ELISA?  酶標(biāo)二抗放大信號(hào)，靈敏度高    抗體檢測(cè)(如HIV、新冠IgG/IgM)?

　　夾心ELISA?  雙抗體夾心結(jié)構(gòu)，特異性強(qiáng)       胞因子(IL-6)、腫瘤標(biāo)志物(CEA)?

　　競(jìng)爭(zhēng)ELISA?  標(biāo)記抗原與樣本抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體 小分子檢測(cè)(激素、藥物)?

　　關(guān)鍵試劑與儀器

　　試劑?：

　　包被緩沖液?(如碳酸鹽緩沖液)?

　　酶標(biāo)抗體?(HRP或AP標(biāo)記)?

　　顯色底物?(TMB或OPD)?

　　終止液?(如硫酸)?

　　儀器?：

　　酶標(biāo)儀(檢測(cè)吸光度)?

　　移液器(精確加樣)?

　　洗板機(jī)(去除未結(jié)合物)?

　　操作步驟(以?shī)A心ELISA為例)

　　包被?：捕獲抗體固定于微孔板，4℃過(guò)夜?。

　　封閉?：加入BSA或脫脂牛奶封閉非特異性位點(diǎn)?。

　　孵育?：加入樣本和檢測(cè)抗體，37℃孵育1小時(shí)?。

　　顯色?：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘?。

　　終止?：加入終止液，酶標(biāo)儀讀取450nm吸光度?。

　　注意事項(xiàng)

　　樣本處理?：避免反復(fù)凍融，離心去除顆粒物?。

　　洗滌?：每次孵育后需洗滌，減少背景信號(hào)?。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：需設(shè)置梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品，確保線性范圍?。

　　注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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