ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)曲和樣本的顯色問題

　　以下是天津本生ELISA實(shí)驗(yàn)中關(guān)于 ?標(biāo)曲和樣本顯色問題? 的常見原因及解決方案，綜合多篇文獻(xiàn)分析整理：

　　一、標(biāo)曲不顯色或顯色弱，樣本正常

　　標(biāo)準(zhǔn)品溶解不充分?

　　溶解時(shí)未渦旋震蕩，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品未溶解或稀釋不均。

　　解決?：使用渦旋震蕩器充分混勻標(biāo)準(zhǔn)品及稀釋液。

　　孵育條件不當(dāng)?

　　靜置孵育導(dǎo)致抗原抗體接觸不充分，建議使用微孔板振蕩器(37℃)。

　　試劑漏加或失效?

　　可能漏加檢測抗體、酶標(biāo)試劑，或試劑因反復(fù)凍融失活。

　　解決?：分裝保存試劑，操作時(shí)標(biāo)記步驟避免遺漏。

　　二、標(biāo)曲和樣本均不顯色

　　系統(tǒng)性問題?

　　酶標(biāo)試劑(如HRP)失活、底物(TMB)污染或過期。

　　解決?：更換新鮮底物，檢查試劑保存條件(避光、防潮)。

　　操作失誤?

　　未按說明書步驟操作(如漏加關(guān)鍵組分)。

　　解決?：嚴(yán)格遵循操作流程，新手建議使用帶染料的試劑盒輔助驗(yàn)證。

　　三、標(biāo)曲顯色正常，樣本不顯色

　　樣本濃度過低?

　　目標(biāo)蛋白濃度低于檢測限，或樣本類型(如血漿、細(xì)胞上清)不匹配。

　　解決?：嘗試高敏ELISA試劑盒或濃縮樣本。

　　樣本干擾物質(zhì)?

　　溶血、細(xì)菌污染、類風(fēng)濕因子等導(dǎo)致假陰性。

　　解決?：離心去除雜質(zhì)，添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本。

　　四、顯色過強(qiáng)或無梯度

　　洗滌不凈

　　殘留HRP酶催化底物過度顯色，尤其是TMB前最后一次洗滌。

　　解決?：確保洗液注滿孔，拍干液體，手動洗板時(shí)更換吸水紙。

　　底物孵育時(shí)間過長?

　　TMB顯色超過15分鐘可能導(dǎo)致OD值飽和。

　　解決?：顯色10-15分鐘后及時(shí)終止(最高濃度孔出現(xiàn)深藍(lán)色即可)。

　　五、其他注意事項(xiàng)

　　移液精度?：定期校準(zhǔn)移液器，避免加樣誤差。

　　環(huán)境控制?：避免底物(TMB)提前氧化(如避光保存)。

　　對照設(shè)置?：陰陽性對照可幫助區(qū)分系統(tǒng)誤差與樣本問題。

　　通過規(guī)范操作和針對性排查，可顯著改善顯色異常問題。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。

　　天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。