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        本生知識點總結:ELISA實驗前準備常見問題
        更新時間:2025-05-15瀏覽:623次


          以下是ELISA試劑盒實驗前準備階段的常見問題及解決方案的整理:

          一、試劑盒選擇與保存問題

          試劑盒類型混淆?

          未區分直接/間接/夾心ELISA試劑盒,導致實驗設計錯誤。

          解決方案:根據檢測目標(抗原或抗體)選擇匹配的試劑盒類型。

          試劑保存不當?

          凍干標準品未在-20℃保存或反復凍融,導致活性喪失。

          顯色劑未避光保存(如底物溶液變黃提示污染)。


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          二、樣本處理問題

          樣本類型錯誤?

          血清未離心直接使用(需3000rpm離心10分鐘取上清)。

          組織樣本未充分勻漿(建議冰浴中機械勻漿10秒/次)。

          樣本保存失效?

          反復凍融導致蛋白降解(建議分裝保存,-80℃可存6個月)。

          細菌污染(采集時需無菌操作,避免內源性酶干擾)。

          三、實驗器材問題

          器材未校準?

          移液器誤差>5%(需定期校準,加樣時間控制在5分鐘內)。

          酶標板未預處理(非即用型試劑盒需自行包被,選用ELISA板材)。

          耗材污染?

          使用普通EP管吸附蛋白(推薦硅化EP管減少吸附)。

          洗板機殘留(手工洗板需垂直拍板,避免交叉污染)。

          四、環境與操作問題

          溫度控制不足?

          試劑未室溫平衡(需提前20分鐘平衡,避免動力學差異)。

          孵育溫度波動(需37℃恒溫,水浴需封閉防蒸發)。

          操作不規范?

          加樣順序混亂(需按說明書順序加樣,保證顯色時間一致)。

          未穿戴防護裝備(需穿實驗服、戴手套口罩防污染)。

          關鍵預防措施

          標準品復溶?:凍干品需冰上溶解,靜置10分鐘輕搖混勻。

          洗滌液配制?:20×濃縮液需1:20稀釋,避免結晶未溶。

          陰性對照設置?:避免高濃度樣本污染空白孔。

          通過規范操作和細節控制可顯著提升實驗成功率。

          如需具體問題排查,可結合實驗步驟對照上述要點。注:以上資料僅供參考。

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